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很實用的Western Blot實驗流程
2017-02-04 瀏覽次數(shù)：3125
什么是WB?
Western Blot中文名稱“蛋白免疫印跡”，是將電泳分離后的細(xì)胞或組織總蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相載體上，而后用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質(zhì)檢測技術(shù)。
一.實驗流程：
樣本制備 ---SDS-PAGE電泳---轉(zhuǎn)膜---封閉---抗體孵育---顯色
二.標(biāo)本類型：
1.細(xì)胞培養(yǎng)上清（胞外）
2.細(xì)胞和組織裂解物
三.組織樣本處理方法：
1．采集標(biāo)本后，稱取組織凈重，用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆茫?/span>
2．標(biāo)本融化后置冰上，加5倍體積冷PBS（可參考文獻(xiàn)加適量蛋白酶抑制劑），低溫勻漿研磨處理；
3．4℃ 6000rpm離心15min，收集上清（注意去掉上層油脂），分裝后一份待檢測，其余冷凍備用；
4. 蛋白定量。
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